Biología en el laboratorio...

1.OBJETIVO. Uso de la cámara de recuento de células, más conocida como cámara de Neubauer, para diferenciar las células muertas de las vivas a través del uso del colorante azul tripán. 2.FUNDAMENTO. Para iniciar un cultivo se debe conocer la densidad celular (número de células/ml). Además, hay que confirmar que las células están vivas (viabilidad).  Ambos procesos se realizan simultáneamente, mediante los siguientes métodos:  • Coloración vital: generalmente se usa el azul tripán, un colorante que penetra en las células que tienen la membrana rota, pero no en las células vivas. Por tanto, al microscopio las células azules no son viables y las blancas son viables.   • Recuento o contaje celular: se usa el colorante vital y se carga en una cámara de recuento o hemocitómetro, generalmente la cámara de Neubauer. Hay que tener en cuenta que se mezclan 10 μl de colorante con 10 μl de cultivo, y se recuentan 4 cuadrados de 1 mm de lado y 0,1 mm de altura. 3.MATERIALES. Gr

1.OBJETIVO. El objetivo de esta práctica es alimentar adecuadamente con el medio de células de insecto, para que las células crezcan y se multipliquen en la superficie del frasco hasta alcanzar una confluencia del 100%. 2.FUNDAMENTO. Los medios de cultivo son compuestos nutritivos que sustituyen el entorno natural en que se encuentran las células fisiológicamente. Están formados por distintos componentes que son: ‒ Fuente de carbono: la glucosa es el sustrato energético más utilizado.  ‒ Fuente de nitrógeno: con función estructural principalmente, aunque también energética. Se deben suplementar aminoácidos, al menos los aminoácidos esenciales. Pueden incluirse otros, según las necesidades de la línea celular.  ‒ Vitaminas: influyen en la tasa de crecimiento y supervivencia celular, su composición depende del medio.  ‒ Suero (al 2-50 %, normalmente 10 %): generalmente de ternera, suero bovino fetal o de caballo. Debe ser descomplementado para evitar lisis celulares.  ‒ Sal

1.OBJETIVO. El objetivo de esta práctica es examinar las células de insectos antes de cada experimento de cultivo celular para asegurar que están sanas y libres de contaminación. 2.FUNDAMENTO. Los cultivos celulares pueden contaminarse muy rápido.Si el medio de cultivo se contamina puede presentar: Levadura: Partículas redondas que son más pequeñas que las células de insectos.Normalmente se ve en cadenas de dos o más. Bacterias: Los medios parecen nublados y pueden tener una película blanca en la superficie.Bajo el microscopio se verán células  pequeñas y granulares, como puntos negros. Hongos:  Micelios filamentosos que cubren el cultivo, como crecimiento borroso que es visible a simple vista. 3. MATERIAL. T-flask con el medio Microscopio invertido 4.PROCEDIMIENTO. Cogemos el t-flask de la incubadora de cultivo  celular y la llevamos a la zona de trabajado del laboratorio. Sujetamos el frasco bajo una fuente de luz y comprobamos si el medi

1.OBJETIVO. El objetivo de esta práctica es la realización de un medio de cultivo a través de la técnica aprendida en la práctica anterior.( practica 3 ) 2.FUNDAMENTO. El cultivo celular es el conjunto de técnicas que permiten el mantenimiento de células in vitro, manteniendo al máximo sus propiedades fisiológicas, bioquímicas y genéticas. El uso de cultivos celulares presenta una serie de ventajas y desventajas: VENTAJAS Permiten un control preciso y fino del medio ambiente.  Homogeneidad de la muestra.  Se pueden controlar las condiciones físico-químicas (pH, temperatura, presión osmótica, presión parcial de O 2 y CO 2) y fisiológicas (hormonas, factores de crecimiento, densidad celular…) Economía. Al acceder directamente a las células, se requieren menores concentraciones de sustancias comparado con el animal o planta completo, además de que no sufren alteraciones metabólicas. Esto reduce el coste de los ensayos clínicos y permite hacer mayor número de pruebas. Cuestio

1.OBJETIVO. El objetivo de esta práctica es conocer la técnica aséptica básica ya que el cultivo de las células depende de mantener las células libres de contaminación de microorganismos tales como bacterias,hongos y virus. Para ello, todos los materiales que entran en contacto con el cultivo celular deben ser estériles y las manipulaciones no deben permitir que el entorno no estéril pueda contaminar el cultivo. 2.FUNDAMENTO. La técnica aséptica es un conjunto de acciones para disminuir los riesgos de contaminación de las muestras/cultivos celulares. Para ello hay que tener en cuenta una serie de cosas como por ejemplo la higiene personal. HIGIENE PERSONAL La utilización de batas de laboratorio y mascarillas son muy RECOMENDADAS para minimizar el riesgo de contaminación de los cultivos celulares. Se debe mantener el pelo largo recogido y hablar lo mínimo durante la manipulación de los cultivos celulares. Se deben usar guantes desechables en todo momento, rociando los con eta

1.OBJETIVO: El objetivo de esta práctica es familiarizarnos con el uso de esta cabina, ya que es una de las cabinas que más usaremos a lo largo de este curso. 2.FUNDAMENTO: Las cabinas de bioseguridad son básicas, ya que lo más importante en el trabajo en Biología Molecular es evitar la contaminación de las muestras, sobre todo en extracción de ARN ya que las ARNasas están muy presentes en el ambiente.  Las cabinas de flujo laminar son cabinas de bioseguridad que protegen al trabajador, al medio ambiente y a la muestra. Están formadas por diferentes filtros HEPA para evitar la contaminación de los materiales y de la muestra. 3.MATERIALES: Micropipeta Tubos Eppendorf Papel de filtro Gradillas Asas de siembra Cabina de flujo laminar 4.PROCEDIMIENTO: Antes de realizar cualquier práctica debemos encender la cabina de flujo laminar con rayos UV durante 10 minutos, la acción de los rayos ultravioleta esterilizan la superficie en la que vamos a trabajar. Mientras la cab

1.OBJETIVO: El objetivo de esta primera práctica es adquirir conocimientos sobre el uso de los distintos tipos de micropipetas y observar su precisión. 2.FUNDAMENTO. Las micropipetas son sistemas automáticos de gran precisión, en los cuales el líquido se carga en puntas de plástico desechables. Las micropipetas se nombran según el máximo volumen que admiten, por ejemplo: p200,p1000 y p5000 admiten un máximo de 200,1000 y 5000 µl respectivamente. A la hora de usar las micropipetas podemos utilizar la técnica directa de pipeteo o la técnica inversa de pipeteo. TÉCNICA DIRECTA DE PIPETEO: 1. Seleccionamos una pipeta adecuada al volumen que necesitamos dispensar o ajustamos el volumen en la pipeta, en el caso de que no sea una pipeta fija. Le colocamos la punta de pipeta. 2. Con el pulgar presionamos el émbolo hasta el primer tope.(a) 3. Introducimos verticalmente la punta en el líquido, si está inclinada no se llenará correctamente. 4. Soltamos lentamente el émbol