Biología en el laboratorio...

1.OBJETIVO. Uso de la cámara de recuento de células, más conocida como cámara de Neubauer, para diferenciar las células muertas de las vivas a través del uso del colorante azul tripán. 2.FUNDAMENTO. Para iniciar un cultivo se debe conocer la densidad celular (número de células/ml). Además, hay que confirmar que las células están vivas (viabilidad).  Ambos procesos se realizan simultáneamente, mediante los siguientes métodos:  • Coloración vital: generalmente se usa el azul tripán, un colorante que penetra en las células que tienen la membrana rota, pero no en las células vivas. Por tanto, al microscopio las células azules no son viables y las blancas son viables.   • Recuento o contaje celular: se usa el colorante vital y se carga en una cámara de recuento o hemocitómetro, generalmente la cámara de Neubauer. Hay que tener en cuenta que se mezclan 10 μl de colorante con 10 μl de cultivo, y se recuentan 4 cuadrados de 1 mm de lado y 0,1 mm de altura. 3.MATERIALES. Gr

1.OBJETIVO. El objetivo de esta práctica es alimentar adecuadamente con el medio de células de insecto, para que las células crezcan y se multipliquen en la superficie del frasco hasta alcanzar una confluencia del 100%. 2.FUNDAMENTO. Los medios de cultivo son compuestos nutritivos que sustituyen el entorno natural en que se encuentran las células fisiológicamente. Están formados por distintos componentes que son: ‒ Fuente de carbono: la glucosa es el sustrato energético más utilizado.  ‒ Fuente de nitrógeno: con función estructural principalmente, aunque también energética. Se deben suplementar aminoácidos, al menos los aminoácidos esenciales. Pueden incluirse otros, según las necesidades de la línea celular.  ‒ Vitaminas: influyen en la tasa de crecimiento y supervivencia celular, su composición depende del medio.  ‒ Suero (al 2-50 %, normalmente 10 %): generalmente de ternera, suero bovino fetal o de caballo. Debe ser descomplementado para evitar lisis celulares.  ‒ Sal