PRÁCTICA 4: Cultivo celular

1.OBJETIVO.
El objetivo de esta práctica es la realización de un medio de cultivo a través de la técnica aprendida en la práctica anterior.(practica 3)
2.FUNDAMENTO.
El cultivo celular es el conjunto de técnicas que permiten el mantenimiento de células in vitro, manteniendo al máximo sus propiedades fisiológicas, bioquímicas y genéticas.
El uso de cultivos celulares presenta una serie de ventajas y desventajas:

VENTAJAS

1. Permiten un control preciso y fino del medio ambiente. 
2. Homogeneidad de la muestra. Se pueden controlar las condiciones físico-químicas (pH, temperatura, presión osmótica, presión parcial de O 2 y CO 2) y fisiológicas (hormonas, factores de crecimiento, densidad celular…)
3. Economía. Al acceder directamente a las células, se requieren menores concentraciones de sustancias comparado con el animal o planta completo, además de que no sufren alteraciones metabólicas. Esto reduce el coste de los ensayos clínicos y permite hacer mayor número de pruebas.
4. Cuestiones éticas. En muchas situaciones permite sustituir al ensayo in vivo, ahorrando gran número de sacrificios de animales de experimentación.

DESVENTAJAS

1. Sensibilidad. Se requieren estrictas condiciones de asepsia, porque el crecimiento de las células es más lento que el de los contaminantes más habituales (hongos, levaduras, bacterias, micoplasmas…).
2. Cantidad y coste. Producir hasta 10 gramos de cultivo no es muy costoso, pero para obtener cantidades superiores a 100 gramos (escala industrial) supone una considerable inversión (biorreactores).
3. Inestabilidad. Muchas líneas celulares continuas son inestables, adoptando dotaciones cromosómicas aneuploides que alteran los resultados. Para ello se resiembra cada cierto tiempo a partir del stock congelado. 
4. Desdiferenciación de las células. Al propagarse, las células pierden las características fenotípicas propias del tejido del que proceden (desdiferenciación).
5. Validez del modelo in vitro. Un cultivo celular pierde ciertas características. Por tanto, se debe ser precavido en cuanto a la validez de los resultados obtenidos.

3.MATERIAL Y REACTIVOS.

Medio de cultivo(penicilina)

T-flasks

Gradilla

Pipetas estériles de 10 ml

Pipetas estériles de 2 ml

Auxiliar de pipeteo

Etanol 70%

Cabina de flujo laminar

Baño termostático

4.PROCEDIMIENTO.

1. Conectamos los rayos UV de la cabina de flujo laminar para esterilizar la superficie.
2. Sacar el medio de cultivo de la nevera y dejar atemperar en el baño termostático.
3. Rociar el tubo de medio, el auxiliar de pipeteo y los guantes con etanol 70% para desinfectarlos y preparar el área de trabajo con la técnica estéril.
   
4. Una vez colocados todos los materiales en el interior de la cabina, nos desinfectamos las manos y empezamos con la práctica.
   
5. Para separar las células del t-flask antiguo damos unos pequeños toquecitos en la superficie del t-flask.
6. Desenroscamos los tapones, para que luego sea más fácil destaparlo.
7. En el t-flask verteremos 1 ml de nuestro antiguo medio de cultivo con una pipeta de 2 ml.
   
8. Una vez vertido, cogemos del medio utilizado para formar los medios 4 ml con una pipeta de 10 ml y lo vertemos en el t-flask que contiene 1 ml.
   
9. Una vez realizado todo esto, etiquetamos el t-flask con la fecha y el nombre del grupo.
10. ¡Ya esta realizado el cultivo celular! Ahora queda meterlo en la incubadora y retirar todos los materiales utilizados y desinfectar la superficie.

5.CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD.

Uno de los requisitos más importantes es la higiene, ya que los cultivos celulares se contaminan fácilmente.

HIGIENE PERSONAL

1. La utilización de batas de laboratorio y mascarillas son muy RECOMENDADAS para minimizar el riesgo de contaminación de los cultivos celulares.
2. Se debe mantener el pelo largo recogido y hablar lo mínimo durante la manipulación de los cultivos celulares.
3. Se deben usar guantes desechables en todo momento, rociando los con etanol 70% y frotandolos para desinfectar ambos guantes.

En mi caso, al ser alérgica a la penicilina y el medio contiene penicilina, por consideración de seguridad no realice la práctica, la realizó mi compañera Elena.

6.GESTIÓN DE RESIDUOS.

Todos los residuos generados fueron desechados en un vaso de precipitados etiquetado como residuos.