PRÁCTICA 5: Seguimiento de la salud de los cultivos.

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1.OBJETIVO.
El objetivo de esta práctica es examinar las células de insectos antes de cada experimento de cultivo celular para asegurar que están sanas y libres de contaminación.
2.FUNDAMENTO.
Los cultivos celulares pueden contaminarse muy rápido.Si el medio de cultivo se contamina puede presentar:

  • Levadura: Partículas redondas que son más pequeñas que las células de insectos.Normalmente se ve en cadenas de dos o más.Imagen relacionada

  • Bacterias: Los medios parecen nublados y pueden tener una película blanca en la superficie.Bajo el microscopio se verán células pequeñas y granulares, como puntos negros.


      • Imagen relacionada

      • Hongos: Micelios filamentosos que cubren el cultivo, como crecimiento borroso que es visible a simple vista.

      Imagen relacionada

      3.MATERIAL.
      T-flask con el medio
      Microscopio invertido

      4.PROCEDIMIENTO.

      1. Cogemos el t-flask de la incubadora de cultivo celular y la llevamos a la zona de trabajado del laboratorio.
      2. Sujetamos el frasco bajo una fuente de luz y comprobamos si el medio esta limpio.Las células de los insectos deben ser visibles como una neblina pálida o un grupo de células en la superficie interior del frasco y el medio en el interior del frasco debe ser claro.
      3. Examinamos las células bajo un microscopio.Buscamos signos de células enfermas que podrían indicar que los medios celulares necesitan ser cambiados y las células necesitan ser subcultivadas. 


        Estas son las células de nuestro cultivo a diferentes aumentos.
      4. Anotamos las observaciones que veamos.
      5. Una vez observadas al microscopio, volvemos a colocar el medio en la incubadora.
      5.RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS.
      Las células presentan una confluencia del 10% con presencia de levaduras por lo que se encuentra contaminado. Algunas células se encuentran apoptóticas.

      6.CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD.
      Es necesario el uso de bata.
      Si se observa contaminación, es importante eliminar rápidamente y seguridad los reactivos y t-flasks contaminados para prevenir la propagación. Añadimos 1 ml de lejía 10% al frasco, incubamos al menos 1 hora y desechamos el cultivo. Limpiamos la incubadora con etanol 70% para prevenir la propagación de la contaminación.




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