PRÁCTICA 2: Manejo de la cabina de flujo laminar.
1.OBJETIVO:
El objetivo de esta práctica es familiarizarnos con el uso de esta cabina, ya que es una de las cabinas que más usaremos a lo largo de este curso.
2.FUNDAMENTO:
Las cabinas de bioseguridad son básicas, ya que lo más importante en el trabajo en Biología Molecular es evitar la contaminación de las muestras, sobre todo en extracción de ARN ya que las ARNasas están muy presentes en el ambiente.
Las cabinas de flujo laminar son cabinas de bioseguridad que protegen al trabajador, al medio ambiente y a la muestra. Están formadas por diferentes filtros HEPA para evitar la contaminación de los materiales y de la muestra.
3.MATERIALES:
Antes de realizar cualquier práctica debemos encender la cabina de flujo laminar con rayos UV durante 10 minutos, la acción de los rayos ultravioleta esterilizan la superficie en la que vamos a trabajar.
Mientras la cabina de flujo laminar hace su efecto, Valentín, nuestro profesor, nos proporcionó 2 disoluciones en 2 matraces Erlenmeyer, etiquetadas con un número cada una.
Como las pipetas miden en µl debemos pasarlo a ml:
El objetivo de esta práctica es familiarizarnos con el uso de esta cabina, ya que es una de las cabinas que más usaremos a lo largo de este curso.
2.FUNDAMENTO:
Las cabinas de bioseguridad son básicas, ya que lo más importante en el trabajo en Biología Molecular es evitar la contaminación de las muestras, sobre todo en extracción de ARN ya que las ARNasas están muy presentes en el ambiente.
Las cabinas de flujo laminar son cabinas de bioseguridad que protegen al trabajador, al medio ambiente y a la muestra. Están formadas por diferentes filtros HEPA para evitar la contaminación de los materiales y de la muestra.
3.MATERIALES:
- Micropipeta
- Tubos Eppendorf
- Papel de filtro
- Gradillas
- Asas de siembra
- Cabina de flujo laminar
4.PROCEDIMIENTO:
Antes de realizar cualquier práctica debemos encender la cabina de flujo laminar con rayos UV durante 10 minutos, la acción de los rayos ultravioleta esterilizan la superficie en la que vamos a trabajar.
Mientras la cabina de flujo laminar hace su efecto, Valentín, nuestro profesor, nos proporcionó 2 disoluciones en 2 matraces Erlenmeyer, etiquetadas con un número cada una.
AZUL-Disolución 1
AMARILLO-Disolución 2
De estas disoluciones tenemos que extraer los siguientes volúmenes:
µl
|
1
|
2
|
A
|
200
| 560 |
B
|
1000
|
30
|
C
|
100
|
5
|
D
|
8
|
830
|
Como las pipetas miden en µl debemos pasarlo a ml:
ml
|
1
|
2
|
A
|
0.2
|
0.56
|
B
|
1
|
0.030
|
C
|
0.1
|
0.005
|
D
|
0.008
|
0.83
|
Una vez terminados los cálculos es hora de ponerse a trabajar, desconectamos la luz ultravioleta de la cabina de flujo laminar y colocamos el papel de filtro en su interior.
El papel de filtro va a ser nuestra superficie de trabajo durante esta práctica.
Colocamos los materiales que vamos a utilizar en esta práctica de forma ordenada, de tal manera que nos sea cómodo a la hora de usarlo para trabajar y no provocar accidentes.
Empezamos:
1. Cogemos la gradilla, donde colocamos los tubos eppendorf y los etiquetamos de la A a la D.
2. Como para cada tubo eppendorf es una medida diferente, debemos utilizar diferentes micropipetas para alcanzar los volúmenes deseados.
TUBO EPPENDORF A.
Para este tubo, tenemos que coger 200 µl de disolución 1(azul) y 560µl
de disolución 2(amarillo).
Una vez cogido el volumen necesario desechamos las puntas
de pipeta en el vaso de precipitados.
Realizamos lo mismo con cada tubo eppendorf.
TUBO EPPENDORF B.
Para este tubo, necesitamos coger 1000µl de disolución 1(Azul) y
30 µl de disolución 2 (amarilla)
TUBO EPPENDORF C
Para este tubo debemos coger 100µl de disolución 1(Azul)
y 5µl de disolución 2(amarilla)
TUBO EPPENDORF D
Para este tubo debemos coger 8µl de disolución 1(Azul) y
830µl de disolución 2(amarilla)
Una vez terminada la medición de cada volumen necesario, retiramos todo el material de la cabina de flujo laminar y limpiamos la superficie con alcohol 70%, después de esto, volvemos a poner los rayos UV para esterilizar la superficie.
5.RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS.
Los resultados obtenidos fueron:
TUBO A: 760µl
TUBO B: 1030µl
TUBO C: 105µl
TUBO D: 838µl
6.CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD.
Principalmente el uso de EPI adecuadamente: uso de guantes y bata; en esta práctica no hemos necesitado el uso de gafas protectoras.
Otra consideración de seguridad sería a la hora de utilizar la cabina de flujo laminar, no debemos usarla cuando los rayos UV están puestos.
7.GESTIÓN DE RESIDUOS.
Los residuos generados fueron las puntas de micropipeta que utilizamos. Todas ellas fueron depositadas en un vaso de precipitados etiquetado como "residuos". Cada grupo disponía de este vaso de precipitados para desechar los residuos más cómodamente.
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