PRÁCTICA 1: Manejo de micropipetas.
1.OBJETIVO:
El objetivo de esta primera práctica es adquirir conocimientos sobre el uso de los distintos tipos de micropipetas y observar su precisión.
2.FUNDAMENTO.
Las micropipetas son sistemas automáticos de gran precisión, en los cuales el líquido se carga en puntas de plástico desechables.
Las micropipetas se nombran según el máximo volumen que admiten, por ejemplo: p200,p1000 y p5000 admiten un máximo de 200,1000 y 5000 µl respectivamente.
A la hora de usar las micropipetas podemos utilizar la técnica directa de pipeteo o la técnica inversa de pipeteo.
TÉCNICA DIRECTA DE PIPETEO:
1. Seleccionamos una pipeta adecuada al volumen que necesitamos dispensar o ajustamos el volumen en la pipeta, en el caso de que no sea una pipeta fija. Le colocamos la punta de pipeta.
2. Con el pulgar presionamos el émbolo hasta el primer tope.(a)
3. Introducimos verticalmente la punta en el líquido, si está inclinada no se llenará correctamente.
4. Soltamos lentamente el émbolo hasta su posición inicial.(b)
5. Sacamos la punta del líquido, tocando con ella las paredes del recipiente para dejar los excesos de líquido del exterior de la punta.
6. Dispensamos el líquido en el recipiente correspondiente,presionando el émbolo hasta el primer tope y después hasta el segundo.(c)
7.Sacamos la punta del recipiente tocando sus paredes y dejamos el émbolo en su posición inicial.(d)
TÉCNICA INDIRECTA DE PIPETEO:
1.Seleccionamos una punta adecuada al volumen o le fijamos el volumen y colocamos la punta.
2.Con él pulgar, presionamos el émbolo hasta él segundo tope.(a)
3.Introducimos verticalmente la punta en él líquido hasta una profundidad adecuada.
4.Soltamos lentamente el émbolo hasta su posición inicial.(b)
5.Sacamos la punta del líquido,tocando con ella las paredes del recipiente.
6.Dispensamos el líquido en él recipiente correspondiente presionando el émbolo hasta el primer tope.(c)
7.Sacamos la punta del recipiente tocando las paredes.
8.Desechamos el resto del líquido(d); luego dejamos el emolo en su posición inicial.(e)
3.MATERIALES:
Los materiales que vamos a utilizar son:
-Gradilla
-5 tubos eppendorf.
-Micropipetas de distintos volúmenes.
-Agua destilada.
-Balanza.
-Puntas de micropipeta de distintos volúmenes.
-Vaso de precipitado.
-Papel de filtro.
4.PROCEDIMIENTO.
La práctica se divide en dos partes:
MEDICIÓN DE LOS DETERMINADOS VOLÚMENES.
Primeramente, prepararemos el lugar de trabajo.
Desinfectamos la superficie que vamos a utilizar y a continuación colocamos un papel de filtro en esta superficie. Sobre el dejaremos los distintos instrumentos que vamos a utilizar, organizandolos de tal forma que sea lo más cómodo posible para aquella persona que realice la práctica.
La medición de los volúmenes que vamos a realizar son: 1000,75,550 y 10 µl.
Para ello cogeremos la pipeta adecuada a cada volumen a medir con su respectiva punta y utilizaremos cualquiera de las dos técnicas de pipeteo que he explicado anteriormente.
Todos los volúmenes fueron tomados desde él vaso de precipitados y fueron depositados en cada tubo eppendorf correspondiente, nombrado del 1 al 5.
CALIBRACIÓN DE LAS MICROPIPETAS.
Para comprobar la calibración de las micropipetas, primero deberemos tarar en la balanza él peso del tubo eppendorf sin ningun contenido, para que no interfiera en el peso. Una vez realizado esto, ya podemos obtener el peso de los demás tubos eppendorf con cada medida correspondiente.
Estos fueron los resultados obtenidos:
1. 1.06 g
2. 1.06 g
3. 1.05 g
4. 1.04 g
5. 1.05 g
Para averiguar el volumen de cada elemento se debe tener en cuenta la densidad del agua: d=m/v.
La densidad entonces era de: 0.99903 g/ml, por lo que para averiguar cada volumen habría que realizar lo siguiente:
5.ANÁLISIS DE RESULTADOS.
Realizamos una tabla con los datos obtenidos, para comparar
y hallar el error sistemático y el error aleatorio.
Para averiguar el error sistemático:
Para averiguar el error aleatorio:
6.CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD.
Uso adecuado de EPI: Guantes y bata, para esta práctica no ha sido necesario
el uso de gafas de protección y tener cuidado a la hora de usar la balanza,
desenchufarla con cuidado, sin tirones etc…
7.GESTIÓN DE RESIDUOS.
Los únicos residuos generados fueron las puntas de pipeta y fueron desechadas
a un vaso de precipitado que se encontraba etiquetado como “Residuos” para
cada superficie de trabajo.
Los materiales que vamos a utilizar son:
-Gradilla
-5 tubos eppendorf.
-Micropipetas de distintos volúmenes.
-Agua destilada.
-Balanza.
-Puntas de micropipeta de distintos volúmenes.
-Vaso de precipitado.
-Papel de filtro.
4.PROCEDIMIENTO.
La práctica se divide en dos partes:
MEDICIÓN DE LOS DETERMINADOS VOLÚMENES.
Primeramente, prepararemos el lugar de trabajo.
Desinfectamos la superficie que vamos a utilizar y a continuación colocamos un papel de filtro en esta superficie. Sobre el dejaremos los distintos instrumentos que vamos a utilizar, organizandolos de tal forma que sea lo más cómodo posible para aquella persona que realice la práctica.
La medición de los volúmenes que vamos a realizar son: 1000,75,550 y 10 µl.
Para ello cogeremos la pipeta adecuada a cada volumen a medir con su respectiva punta y utilizaremos cualquiera de las dos técnicas de pipeteo que he explicado anteriormente.
Todos los volúmenes fueron tomados desde él vaso de precipitados y fueron depositados en cada tubo eppendorf correspondiente, nombrado del 1 al 5.
CALIBRACIÓN DE LAS MICROPIPETAS.
Para comprobar la calibración de las micropipetas, primero deberemos tarar en la balanza él peso del tubo eppendorf sin ningun contenido, para que no interfiera en el peso. Una vez realizado esto, ya podemos obtener el peso de los demás tubos eppendorf con cada medida correspondiente.
Estos fueron los resultados obtenidos:
1. 1.06 g
2. 1.06 g
3. 1.05 g
4. 1.04 g
5. 1.05 g
Para averiguar el volumen de cada elemento se debe tener en cuenta la densidad del agua: d=m/v.
La densidad entonces era de: 0.99903 g/ml, por lo que para averiguar cada volumen habría que realizar lo siguiente:
5.ANÁLISIS DE RESULTADOS.
Realizamos una tabla con los datos obtenidos, para comparar
y hallar el error sistemático y el error aleatorio.
Para averiguar el error sistemático:
Para averiguar el error aleatorio:
6.CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD.
Uso adecuado de EPI: Guantes y bata, para esta práctica no ha sido necesario
el uso de gafas de protección y tener cuidado a la hora de usar la balanza,
desenchufarla con cuidado, sin tirones etc…
el uso de gafas de protección y tener cuidado a la hora de usar la balanza,
desenchufarla con cuidado, sin tirones etc…
7.GESTIÓN DE RESIDUOS.
Los únicos residuos generados fueron las puntas de pipeta y fueron desechadas
a un vaso de precipitado que se encontraba etiquetado como “Residuos” para
cada superficie de trabajo.
a un vaso de precipitado que se encontraba etiquetado como “Residuos” para
cada superficie de trabajo.
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