PRÁCTICA 9: Cariotipo de sangre periférica.(PARTE 4)

BANDEO Y TINCIÓN DE LOS CROMOSOMAS.

1.OBJETIVO.

El objetivo de esta práctica es la tinción y bandeo de los cromosomas para en la siguiente práctica poder observarlas a microscopio.

2.FUNDAMENTO.

Para la observación microscópica de los cromosomas se requiere un elevado grado de condensación. La tinción de cromosomas se realiza con Giemsa (un colorante complejo de tipo Romanowsky) u orceína. Gracias a la tinción:

PODEMOS:

• Contar los cromosomas.
• Ordenarlos por tamaño.
• Calcular el I c P.

NO PODEMOS:

• Identificar todos los cromosomas.
• Detectar anomalías estructurales.

Las técnicas de bandeo tiñen los cromosomas de forma discontinua, definiendo bandas transversales que forman un patrón característico para cada cromosoma. 

BANDEO G 

Es la técnica más utilizada. Consiste en una desnaturalización controlada de las proteínas cromosómicas (por digestión con tripsina), seguida de tinción con Giemsa. Las zonas ricas en AT se tiñen formando bandas oscuras (G+) y las ricas en GC forman bandas claras (G-). 

3.MATERIALES Y REACTIVOS.

Micropipeta

Puntas de micropipeta

Vaso de precipitados

Balanza

Matraz aforado

Embudo

Pipeta Pasteur

Tapón

Vasos de Coplin

Tripsina

Solución tampón pH 6.8

Giemsa

4.PROCEDIMIENTO.

Antes de todo hemos elaborado tripsina y suero fisiológico, ya que no quedaban.

Como hallar el suero fisiológico:

1.Necesitamos 50 ml de suero fisiológico que se encuentra a 0,9% p/v, por lo que realizamos los cálculos necesarios para hallar la cantidad de sal que necesitamos depositar.

2. Una vez que conocemos la cantidad necesaria, enchufamos la balanza y 

taramos un vaso de precipitados. Una vez tarado, vamos añadiendo 

NaCl hasta alcanzar la cantidad deseada.

3. Añadimos la cantidad de NaCl(0,45g) y llenamos un poco con agua 

destilada para diluirla.

4. Una vez diluido, lo depositamos en un matraz aforado y enrasamos con 

la pipeta Pasteur hasta alcanzar los 50 ml.

Como hallar la tripsina:

Anteriormente hemos hallado el suero fisiológico por que es necesario para

poder formar la tripsina.
Para no enrollarme mucho, os dejo la práctica aquí donde
 explico como hallamos la tripsina.OBTENCIÓN TRIPSINA

Comenzamos con la práctica:

1.Preparamos la tripsina, el tampón pH 6,8 y la Giemsa.

2. Una vez preparados, los depositamos en unos vasos de Coplin. Después 

hemos hecho un recorrido para que sea más fácil, anotando 

lo que hay que hacer en cada uno en el papel de filtro.

3. Introducimos el porta en la TRIPSINA, durante unos 4-6 segundos.

4.Se amortiguará la acción de la tripsina introduciendo inmediatamente el porta en el TAMPÓN pH 6,8.

5.A continuación, depositamos el porta en la GIEMSA durante 2 minutos.

6. Después de esperar los 2 minutos, se lava el porta con 

agua del grifo, bajo el chorro.

7.Se deja secar al aire o se seca con cuidado con el papel de filtro(sin tocar la superficie donde estén fijados los cromosomas) y ya se pueden observar al microscopio.

5.CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD.

-Mantener el orden en el área de trabajo para evitar cualquier accidente.

-Examinar los instrumentos antes de utilizarlos, para evitar accidente por rotura.

-Uso correspondiente de EPI.

6. GESTIÓN DE RESIDUOS.

Los únicos residuos generados fueron las puntas de micropipeta y fueron desechadas a un vaso de precipitados.