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PŔACTICA 15: ELECTROFORESIS.

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1.OBJETIVO. El objetivo de esta práctica es aprender a como preparar el gel de agarosa y el tampón TAE para poder realizar la correspondiente electroforesis 2.FUNDAMENTO. Se denomina electroforesis a la técnica mediante la cual se separan las biomoléculas en disolución cuando se ven sometidas a un campo eléctrico. Se trata de una técnica fundamentalmente analítica, aunque también se puede realizar con fines preparativos. 3. MATERIALES. Los materiales utilizados a lo largo de la práctica han sido:  Micropipeta Tampón TAE 2 probetas Embudo 2 vasos de precipitados  Agua destilada Frasco 4.PROCEDIMIENTO. Preparación del gel de agarosa. Necesitaremos 0.9g de Agarosa por cada 100 ml de agua destilada. En este caso solo vamos a preparar 100 ml. Disolvemos los polvos de agarosa en el agua. una vez mezclados, lo depositamos en un frasco y lo calentamos en el microondas hasta que empiece a burbujear. Después de calentarlo tenemos que añadirle 4,5 µl  de
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PRÁCTICA 14: DETERMINACIÓN DEL FACTOR Rh POR PCR.

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1.OBJETIVO. El objetivo de esta práctica es aprender los principios básicos de la PCR mediante el estudio de la determinación del Rh. 2.FUNDAMENTO. La PCR ha revolucionado la investigación y diagnostico basado en la biología molecular. La PCR es una técnica de amplificación del ADN que permite obtener millones de copias idénticas de un fragmento concreto de ADN partiendo de una mínima cantidad de ADN molde. Fue ideado por Kary Mullis en 1985 , utilizando polimerasa de ADN termoestables extraidos de microorganismos termófilos, como la Taq Polimerasa, extraida de Thermus Aquaticus.   3.MATERIALES. Microtubos Eppendorf Pipeta regulable Puntas de micropipeta Gradilla Mix PCR Espectrofotómetro  Termociclador Cubeta de espectrofotómetro 4. PROCEDIMIENTO. En la práctica pasada, tras la centrifugación obtuvimos el ADN genómico en un tubo Eppendorf y lo metimos en el congelador. Esta práctica comienza sacando los tubos del congelador y atemperándolos. Una vez
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PRÁCTICA 13: EXTRACCIÓN DE ADN A PARTIR DE SANGRE TOTAL , BUFFY COAT Y FLUIDOS BIOLÓGICOS.

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1.OBJETIVO. El objetivo de esta práctica es una rápida extracción y purificación de ADN genómico de alta calidad a partir de sangre total, suero, plasma y fluidos biológicos utilizando Spin columnas con membrana de sílica que une selectivamente el ADN. 2.FUNDAMENTO. Los estudios en Biología Molecular y Citogenética requieren trabajar con muestras de ADN o ARN puras. Por eso, es necesario conocer las técnicas que nos permiten seleccionar, obtener y preservar las muestras para poder obtener resultados fidedignos. La purificación consiste en separar los ácidos nucleicos de los demás componentes del lisado (debris) Para la purificación tendremos en cuenta diversas propiedades de los ácidos nucleicos: • En medio alcalino, el ADN se desnaturaliza (proceso reversible), pero el ARN se hidroliza. • La concentración de sales permite la solubilidad diferencial de ADN, ARN y proteínas (sobre todo si son desnaturalizadas). • Los ácidos nucleicos son insolubles en alcoholes. 3
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