PRÁCTICA 13: EXTRACCIÓN DE ADN A PARTIR DE SANGRE TOTAL , BUFFY COAT Y FLUIDOS BIOLÓGICOS.
1.OBJETIVO. El objetivo de esta práctica es una rápida extracción y purificación de ADN genómico de alta calidad a partir de sangre total, suero, plasma y fluidos biológicos utilizando Spin columnas con membrana de sílica que une selectivamente el ADN. 2.FUNDAMENTO. Los estudios en Biología Molecular y Citogenética requieren trabajar con muestras de ADN o ARN puras. Por eso, es necesario conocer las técnicas que nos permiten seleccionar, obtener y preservar las muestras para poder obtener resultados fidedignos. La purificación consiste en separar los ácidos nucleicos de los demás componentes del lisado (debris) Para la purificación tendremos en cuenta diversas propiedades de los ácidos nucleicos: • En medio alcalino, el ADN se desnaturaliza (proceso reversible), pero el ARN se hidroliza. • La concentración de sales permite la solubilidad diferencial de ADN, ARN y proteínas (sobre todo si son desnaturalizadas). • Los ácidos nucleicos son insolubles en alcoholes. 3